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- 影響膠原酶Q32853消化組織的因素
- 點(diǎn)擊次數(shù)：2738 更新時(shí)間：2019-05-23
- 膠原酶Q32853是分解天然膠原蛋白的酶，由多種微生物和許多不同的動(dòng)物細(xì)胞制造。有效的膠原酶是由厭氧細(xì)菌——溶組織梭菌分泌的“粗”膠原酶。由MacLennan，Mandl和Howes于1953年首先提出的發(fā)酵和純化過(guò)程首先被Sigma-Aldrich采用，并終被改進(jìn)用于生產(chǎn)更高活性的產(chǎn)品。“粗”膠原酶是指該物質(zhì)實(shí)際上是一種混合物，除膠原酶之外還有幾種不同的酶，它們共同作用以分解組織。目前已知存在膠原酶的兩種形式。除了少數(shù)例外，目前不同的商業(yè)膠原酶全部由溶組織梭菌制造，或者是克隆自溶組織梭菌基因的大腸桿菌表達(dá)的重組形式。
膠原酶Q32853按其存在的方式不同可分為人體內(nèi)源性膠原酶和藥用膠原酶兩種。人體內(nèi)源性膠原酶是指人體內(nèi)部本身所具有的膠原酶，如牙齦、觸膜等上皮組織和關(guān)節(jié)滑膜、椎間盤(pán)內(nèi)都不同程度的存在著這種膠原酶，它在體內(nèi)膠原蛋白的分解過(guò)程中發(fā)揮著*的作用。藥用膠原酶是指利用生物制藥的高科技手段從溶組織梭狀芽孢桿菌的發(fā)酵液中提取、純化并精制而得的白色或類白色無(wú)菌凍干粉針生物制劑。
膠原酶Q32853的類型：
1、膠原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì) 胞，用于哺乳動(dòng)細(xì)胞的分離。
2、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。
3、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個(gè)細(xì)胞。
4、膠原酶Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織。
影響膠原酶Q32853消化組織的因素：
基于我們自己的研發(fā)和與客戶討論的結(jié)果，顯然，特定組織的解離和制備方式對(duì)膠原酶消化-解離速度和效率都有顯著影響。組織供體年齡差異也可能是隨時(shí)間變化的主要原因。請(qǐng)確保消化緩沖液中鈣離子濃度為5 mM。螯合劑EGTA和EDTA可去除鈣離子，從而嚴(yán)重抑制膠原酶活性。β-巰基乙醇16、半胱氨酸16和8-羥基喹啉-5-磺酸鹽16也是膠原酶抑制物。一些較高特異性和活性的膠原酶能夠確定濃度下導(dǎo)致過(guò)量細(xì)胞死亡。這種情況下，可減少膠原酶用量和/或添加0.5%的BSA或5-10%的血清，以穩(wěn)定細(xì)胞來(lái)進(jìn)一步消化。 - 上一篇：詳細(xì)分析轉(zhuǎn)染試劑的應(yīng)用以及使用效果
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