羅氏蛋白酶磷酸酶抑制劑解決了對(duì)磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù) 羅氏蛋白酶磷酸酶抑制劑許多生物學(xué)過程和通路的調(diào)節(jié)都伴隨著磷酸酯的形成和去除;而蛋白的磷酸化狀態(tài)的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影響達(dá)到的。為了了解這些通道,大量的研究工作正在制藥公司和研究院所開展。其中一個(gè)重要的步驟就是準(zhǔn)確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài),而這就需要對(duì)磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù)。
磷酸化的蛋白可以被非特異性的磷酸酶(例如:堿性磷酸酶),特異性的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或雙重特異性磷酸酶去磷酸化。這里,我們就一種新的磷酸酶抑制劑混合片的性能做一介紹,稱之為PhosSTOP。PhosSTOP是一種即用型的片劑,其中的一些磷酸酶抑制劑只需要納摩爾級(jí)的量。羅氏蛋白酶磷酸酶抑制劑無需花費(fèi)漫長的時(shí)間尋找合適的磷酸酶,也不必繁瑣的稱量和混合。PhosSTOP可同時(shí)持續(xù)抑制包括酸性和堿性磷酸酶,及絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶在內(nèi)的多種磷酸酶。
一片PhosSTOP可以溶解在10ml的緩沖液中。PhosSTOP具有*的溶解性,如果需要,可以將2-3片PhosSTOP也可溶解在同樣體積的緩沖液中;相反,也同樣也可以選用小體積的緩沖液。溶解后的儲(chǔ)存液體4℃可以穩(wěn)定保存一個(gè)月以上,-20℃下可以保存6個(gè)月。
羅氏蛋白酶磷酸酶抑制劑磷酸酶無處不在;依賴于不同的物種、細(xì)胞或組織類型、實(shí)驗(yàn)中使用的特異的細(xì)胞狀態(tài),磷酸酶的種類和數(shù)量都會(huì)有差異。雖然每種磷酸酶都表現(xiàn)出不同的底物特異性,依賴不同的物種,幾種分離磷酸酶用以測試抑制效果的范圍。