緩沖劑通常是由弱酸及其共軛堿或弱堿及其共軛酸緩沖對所組成的溶液,能夠在加入一定量其他物質(zhì)時減緩pH的改變。以生物實驗中常用的一種緩沖液PBS為例,是由Na2HPO4、KH2PO4組成的緩沖對,在PH5.8-8.0范圍內(nèi)有較強的緩沖能力。
常見組成:
常用作緩沖劑的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有:
1、弱酸和它的鹽(如HAc—NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O—NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽(如NaH2PO4—Na2HPO4)的水溶液組成。
而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、Barbituric acid、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結果的因素并不是緩沖劑的pH值,而是緩沖劑中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應。
硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。
檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
磷酸鹽:在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。
三羥甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的緩沖劑,4℃時是8.4,37℃時是7.4,因此,4℃配制的緩沖劑在37℃進行測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。在pH7.5以下,其緩沖能力極為不理想。