熒光探針作用用途:
常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體,亦可用于微環(huán)境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大,熒光量子產(chǎn)率高;熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時(shí),與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。
也可用于標(biāo)記待定的核苷酸片斷,用與特異性地、定量地檢測核酸的量。
熒光探針分類檢測:
目前常用的熒光探針有熒光素類探針、無機(jī)離子熒光探針、熒光量子點(diǎn)、分子信標(biāo)等。熒光探針除應(yīng)用于核酸和蛋白質(zhì)的定量分析外,在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術(shù)以及DNA測序上都有著廣泛的應(yīng)用。
目前,檢測熒光探針的方法主要有單點(diǎn)測定和電荷耦合裝置熒光成像。由于光電倍增管點(diǎn)掃描時(shí)間較長,激光照射強(qiáng)度高,很難抓住熒光早期變化。而CCD熒光成像的面陣大,成像視野廣,成像時(shí)間可以調(diào)節(jié),因而檢測效果比較好。
化學(xué)發(fā)光檢測的zui大特點(diǎn)是設(shè)備簡單、操作簡便、分析速度快及靈敏度高?;瘜W(xué)發(fā)光成像分析(CLI)是將化學(xué)發(fā)光與成像技術(shù)相結(jié)合,從而具有分辨率高、多樣品同時(shí)檢測、光譜響應(yīng)范圍寬以及靈敏度高等特點(diǎn)[10,11],已廣泛應(yīng)用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學(xué)發(fā)光信號檢測。本實(shí)驗(yàn)建立了TCPO?咪唑?H2O2?熒光探針化學(xué)發(fā)光成像體系。由于化學(xué)發(fā)光不需要任何光源,因而在對熒光探針進(jìn)行化學(xué)發(fā)光成像檢測時(shí),不存在熒光檢測或者熒光成像時(shí)不可避免的光學(xué)背景的干擾,從而可以獲得更低的檢出限。用此體系對5種熒光探針進(jìn)行定量分析,并研究了用四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記的單克隆羊抗人IgG的化學(xué)發(fā)光成像,檢出限達(dá)10-11mol/L,比相同條件下熒光成像的檢出限低一個數(shù)量級。